DH5α大腸桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細胞

DH5α Electrocompetent cell

大腸桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細胞

產(chǎn)品標(biāo)簽：

DH5α Electrocompetent Cell 電ji感受態(tài)細胞；*0；DH10B；XL1-Blue；1mm電轉(zhuǎn)杯（電ji杯）；Biorad 1652083；

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菌株描述

DH5α是實驗室常用的一種質(zhì)粒克隆用菌株，其φ80lacZ△M15基因的產(chǎn)物可與載體編碼的 β-半乳糖苷酶氨基端實現(xiàn)α互補，可用于藍白斑篩選。recA1和endA1的突變有利于克隆DNA的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒DNA的提取。特別適用于高效的質(zhì)粒DNA克隆并能保證高拷貝質(zhì)粒的穩(wěn)定復(fù)制。

DH5α菌株基因型： F^- φ80 lac ZΔM15 Δ(lacZYA-arg F) U169 endA1 recA1 hsdR17(rk^-,mk⁺) supE44λ- thi-1 gyrA96 relA1 phoA

產(chǎn)品描述

本品是大腸桿菌DH5α菌株經(jīng)特殊工藝制作所得的電ji感受態(tài)細胞，只能用于DNA的電ji轉(zhuǎn)化，不能用于熱激轉(zhuǎn)化。經(jīng)pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率可達1×10¹⁰ cfu/μg DNA。且在-80℃能穩(wěn)定保存幾個月轉(zhuǎn)化效率不發(fā)生改變。

產(chǎn)品包裝

保存與運輸條件：

保存：-80℃保存，六個月有效。

運輸：干冰運輸。

注意事項

1） 感受態(tài)細胞保存在-80℃以下，不可反復(fù)凍融和放置時間過長，以免降低感受態(tài)細胞的轉(zhuǎn)化效率。

• 整個轉(zhuǎn)化操作，嚴(yán)格根據(jù)相應(yīng)溫度及無菌條件要求進行。
• 加入DNA的體積不應(yīng)大于感受態(tài)體積的1/10。DNA不純或存在鹽、乙醇、蛋白及緩沖液等污染時，會導(dǎo)致轉(zhuǎn)化效率急劇下降。
• 為確保高轉(zhuǎn)化效率，整個操作過程應(yīng)盡量輕柔，并保持低溫。

5） 電ji感受態(tài)細胞加入電ji杯應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡，氣泡會增加弧光放電風(fēng)險。

6） 電ji杯里的離子可增加溶液的電導(dǎo)，增大在含有細胞和DNA的溶液中產(chǎn)生電流和弧光放電的風(fēng)險。

7） 若轉(zhuǎn)化大質(zhì)粒或想獲得較高轉(zhuǎn)化效率，推薦使用高純質(zhì)粒提取試劑盒提取質(zhì)粒。質(zhì)粒增大一倍，轉(zhuǎn)化效率下降一個數(shù)量級。

8） 對于連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化：在轉(zhuǎn)化前乙醇沉淀DNA后用適量TE緩沖液重懸產(chǎn)物，保證DNA濃度不超過100ng/μl。過高濃度連接產(chǎn)物或過大體積連接產(chǎn)物會降低轉(zhuǎn)化效率，增加弧光放電的風(fēng)險。

9） 混入質(zhì)粒時應(yīng)輕柔操作，吸取感受態(tài)細胞時不可用孔徑過小的槍頭（普通200μl槍頭應(yīng)剪去槍頭尖0.6cm）。避免用力過猛，以免剪切力過大損傷細胞膜，降低轉(zhuǎn)化效率。轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒或連接產(chǎn)物可相應(yīng)減少終用于涂板的菌量。

10） 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在無菌條件的標(biāo)準(zhǔn)下進行】

1）將0.1 cm電ji杯和杯蓋從儲存液中拿出倒置于干凈吸水紙上5min，待其瀝干水分，正置5min，使乙醇充分揮發(fā)干凈，立即插入冰中，壓實冰面，電極杯頂離冰面0.5cm以方便蓋上杯蓋，冰中靜置5min使其充分降溫。

2）取-80℃保存的電ji感受態(tài)細胞插入冰中5min，待其*融化。加入目的DNA（質(zhì)粒或連接產(chǎn)物），用手拍打管底輕輕混勻，避免產(chǎn)生氣泡，立即插入冰中。

【注意】：①若需要測定轉(zhuǎn)化效率，使用1μl 對照質(zhì)粒 pUC19（10 pg/μl）；②對于連接產(chǎn)物，請用乙醇沉淀DNA后加入適量TE buffer（貨號：MS3537-500ML）重懸，DNA濃度不要超過100ng/μl，體積不超過5μl/50μl感受態(tài)。

3）用200μl槍頭將感受態(tài)-DNA混合物快速移到電ji杯中，避免產(chǎn)生氣泡，蓋上杯蓋。

4）啟動電轉(zhuǎn)儀，設(shè)置參數(shù)：C=25 μF，PC=200 ohm，V=1800 V（此參數(shù)參考Bio-rad，具體使用請參考電轉(zhuǎn)儀推薦步驟來操作），將電ji杯快速放入電轉(zhuǎn)槽中，電ji完成快速插入冰中。

5）2min后從冰中取出電ji杯，放室溫，加入700μl不含抗生素的無菌SOC培養(yǎng)基（室溫），用1ml槍吹吸電ji杯底部數(shù)次混勻后，轉(zhuǎn)移到50ml離心管（比如：BD Falcon 50ml錐形離心管），向離心管中補加SOC培養(yǎng)基至5ml。37℃，225 rpm復(fù)蘇60min。

6) 5000rpm，1min離心收菌，重懸后取100-200μl涂布到含相應(yīng)抗生素的SOC平板上（因菌量較大，若全部

涂板請選用直徑15cm培養(yǎng)皿2-5個）。將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)13-17h。

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 — —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】

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