大腸桿菌化學感受態細胞表達分析

BJ5183-AD-1 Chemically Competent Cell

大腸桿菌化學感受態細胞

產品標簽：

BJ5183-AD-1；BJ5183；pAdeasy-1；pAdeasy-2；腺病毒系統；卡那mei素；鏈mei素；

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產品組分：

菌株描述

BJ5183菌株是一種具較高重組活力的大腸桿菌菌株，提供了轉移載體和含腺病毒基因組載體之間發生重組事件必要的元件，是目前腺病毒系統zui常用的菌株之一。BJ5183菌株含recBC sbcBC雙重突變，賦予其較強的重組能力，有利于目的基因與腺病毒骨架質粒的重組。另外，BJ5183菌株含endA突變（編碼核酸內切酶），這一突變賦予recBC sbcBC突變菌株更高的雙鏈斷裂修復活性，也有利于重組DNA的穩定和高純質粒的提取。StrR賦予BJ5183菌株鏈mei素抗性。

BJ5183-AD-1菌株是攜帶腺病毒質粒pAdeasy-1（E1/E2 deleted）的BJ5183菌株，pAdeasy-1孵育該菌株氨芐抗性（AmpR）。在病毒質粒構建時，只需轉入線性化目的質粒即可，簡化實驗步驟，提高了病毒質粒重組概率。

BJ5183-AD-1菌株基因型：endA1sbcBCrecBCgalKmet thi-1bioThsdR (StrR) [pAdEasy-1 (AmpR)]

產品描述

本品是大腸桿菌BJ5183-AD-1菌株經特殊工藝制作所得的感受態細胞，可用于DNA的熱擊轉化。經pCAMBIA2301載體檢測轉化效率>1×105 cfu/μg DNA。且在-80℃能穩定保存幾個月轉化效率不發生改變。

保存與運輸條件：

保存：-80℃保存，六個月有效。

運輸：干冰運輸。

注意事項

1） 感受態細胞必須用干冰運輸。感受態細胞應在-80℃保存（避免溫度波動），不可反復凍融且放置時間過長，否則會減低感受態細胞的轉化效率。

2） 最好在冰上緩慢融化感受態細胞。不可在冰上放置時間過長，否則會降低轉化效率。

3） 進行轉化操作時，需在相應溫度及無菌條件下進行。

4） 轉化高濃度的質粒可相應減少最終用于涂板的菌量。

5） 為防止轉化實驗不成功，可保留部分連接反應液以重新轉化，將損失降到zui低。

6） 產品包裝內含載體pCAMBIA2301 DNA(10 ng/μl)，供對照實驗用。

7） BJ5183-AD-1菌株的質粒產量不高。腺病毒構建成功后，可選擇在其它大腸桿菌菌株擴繁和純化質粒。

8） BJ5183-AD-1感受態細胞對溫度敏感，需儲存在-80℃超低溫冰箱，避免溫度波動，以免感受態轉化效率降低。

9） 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在無菌條件的標準下進行】

1） 從-80℃冰箱取出取感受態細胞，迅速置于冰浴中，5min后待菌塊融化，加入目的質粒（含有目的基因并且是線性化），用手輕彈管底輕輕混勻（避免用槍吹打），冰浴靜置25min。

2） 42℃水浴熱激45s，迅速將離心管轉移到冰浴中，冰上靜置2min。此過程不要搖動離心管。

3） 向每個離心管中加入700 μl無菌的2YT或LB培養基（不含抗生素），混勻后置于37℃搖床，200 rpm振蕩培養60min，目的使質粒上相關的抗性標記基因表達，使菌體復蘇。

4） 低速離心收菌（比如5000rpm，1min），留取100μl左右上清，用槍輕輕吹打重懸菌塊，之后加到含相應抗生素的2YT或LB固體瓊脂培養基上，用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開，將平板置于室溫（或37℃）直至液體被吸收，之后倒置放于37℃過夜培養。

【注意】：

a）涂布用量可根據具體實驗調整。若轉化的DNA總量較多，可不用離心，直接取少量轉化產物涂布平板；反之，若轉化的DNA總量較少，則通過離心（5,000 rpm，1min）后吸除部分培養液，懸浮菌體后將其涂布于一個平板中。

b）新制備的固體培養基不易涂干，可將平板正置于37℃直至液體被吸收后再倒置培養。

c）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉化菌落數過少，可以將剩下的菌液再涂布新培養基進行培養。

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 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

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