脂膜熒光探針

Laurdan (6-Dodecanoyl-2-Dimethylaminonaphthalene)

脂膜熒光探針

產品信息

產品描述

6-丙烯酰基-2-二甲氨基萘（6-Dodecanoyl-2-Dimethylaminonaphthalene,Laurdan），是一種極性敏感的熒光探針，用于膜內脂筏（Lipid rafts）的成像分析。適用于廣義偏振（GP）成像和掃描熒光相關光譜（FCS）。適用于活細胞和固定細胞，以及用多光子顯微鏡檢測的全組織成像分析。

Laurdan是由一條月桂酸長鏈連接到一個萘分子上組合而成。脂肪酸的疏水性尾使探針能牢牢嵌入脂質雙分子層；而分子上的萘部分定位在膜磷脂的甘油骨架上。Laurdan的化學結構和膜定位性使其對脂質雙分子層中水分子的存在和流動性都非常敏感。Laurdan在廣義偏振的定量能用于鑒別磷脂相態。當用340nm激發，凝膠相的廣義偏振值是0.6，液晶相的廣義偏振值是-0.2。廣義偏振僅隨相態而變化，不會因一極性頭部或4-10范圍內的pH變化而變化。

產品特性

1） CAS NO.：74515-25-6

2） MDL NO：MFCD00467560

3） 化學名：1-[6-(Dimethylamino)-2-naphthalenyl]-1-dodecanone

4） 分子式：C24H35NO

5） 分子量：353.54

6） 純度：≥98%

7） 外觀：固體

8） 溶解性：溶于DMF (10mM)

9） 熒光：λex/ λem =366/497 nm (methanol)

【注意】：Laurdan插入膜后，熒光光譜對周圍磷脂生理狀態非常敏感。最大激發和發射波長分別是366/497nm。在膜的凝相態和液相態的最大發射波長分別為~440n和~490nm。

10）化學結構式：

保存與運輸方法

保存：2-8oC避光干燥保存，亦可置于-20oC避光干燥延長保存，至少2年有效。

運輸：室溫運輸。

注意事項

1）熒光染料均存在淬滅問題，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。

2）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

產品使用

一、 儲存液制備

將低溫保存的Laurdan（Mw: 353.54）置于室溫回溫至少20min，低速離心后加入一定量的DMF配制成適量濃度的母液，比如10mM（往5mg粉末加入1.41ml DMF，充分溶解即可）。根據單次用量將儲存液分裝，≤-20℃避光干燥保存（-20℃ 1-2個月內使用；-80℃保存3-6個月內使用）。需注意溶液內濕度的逐漸積累會隨著時間引起探針聚集，從而務必干燥保存儲存液。

二、 染色工作液制備

用HHBS、HBSS、不含血清的基礎培養基或無血清培養基等稀釋Laurdan儲存液到適宜的工作濃度，比如：5-50µM。最佳的工作濃度需自行優化。染色工作液需現配現用。

三、 操作步驟（以細胞染色為例）

以下操作步驟僅做參考，用戶需結合自身的實驗目的和實驗條件來優化整個實驗流程。

應用示例（來自文獻，僅做參考）

文獻1）Pilkington, E., Gurzov, E., Kakinen, A. et al. Pancreatic β-Cell Membrane Fluidity and Toxicity Induced by Human Islet Amyloid Polypeptide Species. Sci Rep 6, 21274 (2016). 

實驗目的：Laurdan用來測定細胞膜相態（Lipid order）和比率成像分析。

實驗方法：

j儲存液：Laurdan溶于DMSO配制成4mM儲存液。

k染色流程：a）MIN6小鼠胰島β細胞接種到包被有多聚賴氨酸的8孔板，培養過夜。b）成像前，去除舊培養基，更換不含血清的Opti-MEM，加入Laurdan染料使其工作濃度為50μM，加載至少30min使染料插入細胞膜達到平衡。c）將細胞轉移到安裝有細胞培養室的Leica SP8倒置共聚焦顯微鏡，選取每孔的適當區域（至少10個活細胞）進行觀察。加入不同藥物到相應孔內。以1-30min為時間點，收集2h內的成像數據。Lauran插入膜后用405nm激發線激發，分別讀取430~470nm（代表脂膜處于凝膠/液態有序相）或480~550nm（代表脂膜處于液體不穩定相）。

染色示例：

Fig. Laurdan dye as an indicator of cell membrane lipid order and ratiometric imaging.

Laurdan (6-Dodecanoyl-2-dimethylaminonaphthalene) is a lipophilic dye capable of partitioning into cell phospholipid membranes (A). When excited at the 405?nm laser line, Laurdan emits fluorescence at 450?nm when the cell membrane is in the gel/liquid ordered phase (lo; left panel) and redshifts to 500?nm when the cell membrane is in the liquid disordered phase (ld; right panel). hIAPP monomers, oligomers and amyloid fibrils are predicted to cause lipid disorder (A). Intensity shifts between the ordered and disordered channels can be quantified as generalised polarisation (GP) values. A flowchart outlining the calculation of GP values from raw ratiometric confocal images in the ordered and disordered channels is represented by (B).

文獻2）Mizuno M, Matsuzaki T, Ozeki N, Katano H, Koga H, Takebe T, Yoshikawa HY, Sekiya I. Cell membrane fluidity and ROS resistance define DMSO tolerance of cryopreserved synovial MSCs and HUVECs. Stem Cell Res Ther. 2022 May 3;13(1):177. doi: 10.1186/s13287-022-02850-y. PMID: 35505370; PMCID: PMC9066911.

實驗目的：Laurdan用來測定細胞膜流動性（Cell membrane fluidity）。

實驗方法：

j儲存液：Laurdan溶于DMSO配制成9mM儲存液。

k染色流程：于實驗前將Laurdan儲存液用RPMI 1640稀釋到工作濃度（33μM），細胞于室溫孵育30min。用共聚焦顯微鏡捕獲細胞熒光圖片。405nm激發光源，分別測定發射波長在406-460nm（I406–460）和470-530nm（I470–530）的熒光強度，計算廣譜偏振（GP），從而評估膜流動性。

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— —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

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